反义HLA-A2和GDNF共表达逆转录病毒载体的构建和鉴定-神经解剖学杂志

反义HLA-A2和GDNF共表达逆转录病毒载体的构建和鉴定

单位：首都医科大学,北京神经科学研究所,北京市神经再生修复研究重点实验室,北京,100054

分类号：R3

出版年·卷·期（页码）：2005·21·第二期（1-1）

摘要：

为构建GDNF和反义HLA-42共表达的逆转录病毒载体,将人GDNF酶切片段(Xho Ⅰ/SalⅠ)克隆于逆转录病毒载体pLNCX2的Xho Ⅰ位点,再将HLA-A2 cDNA片段反向克隆于上述重组载体的Hind Ⅲ/Sal Ⅰ位点,对其作酶切鉴定和测序后转染PA317包装细胞系进行病毒的包装.收获重组病毒感染的NIH3T3并进行病毒滴度的测定,GDNF及HLA-42表达的RT-PCR检测,进一步感染人胚肺成纤维细胞,观察GDNF分泌情况.结果表明:GDNF和反义HLA-A2两片段的序列和插入方向完全正确,包装后获得的重组病毒的平均滴度为5×105CFU/ml.RT-PCR显示:在小鼠源性的PA317细胞中有人GDNF和HLA-A2的表达,ELISA法测得病毒感染人胚肺成纤维细胞上清液中GDNF含量为450 pg/ml.通过本实验,我们获得能共表达GDNF和反义HLA-A2的重组逆转录病毒,其转染的人成纤维细胞具有合成GDNF的能力.

参考文献：

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