摘要:
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为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclear related receptor 1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础.实验采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从人胎儿脑中获取Nurr1 cDNA,将其克隆至pGEM-T Easy载体中;测序鉴定后,重组携带Nurr1基因的逆转录病毒载体pLNCX2-Nurr1;通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH 313细胞系以检测病毒滴度.结果发现,RT-PCR扩增得到人Nurr1 cDNA片段,序列与GenBank登录的序列一致;将Nurr1基因亚克隆至逆转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLNCX2-Nurr1,病毒上清滴度为2×105 CFU/ml.结果表明本实验获得人Nurr1基因cDNA序列,检测到Nurr1基因在真核细胞中表达,并得到较高滴度的病毒上清. |
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参考文献:
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