应用载体介导的RNA干扰技术抑制Nurr1基因在PT67细胞中的表达-神经解剖学杂志

应用载体介导的RNA干扰技术抑制Nurr1基因在PT67细胞中的表达

单位：首都医科大学,北京神经科学研究所,北京市神经再生修复重点实验室,教育部神经变性病重点实验室,北京,100069

分类号：R3

出版年·卷·期（页码）：2007·23·第二期（1-1）

摘要：

本研究应用载体介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术特异地干扰孤儿核受体1(nuclear related factor1,Nurr1)基因的表达,以建立稳定的RNAi技术及用于下一步的Nurr1基因治疗研究.我们筛选了四对Nurr1基因的特异性序列 shRNA(short hairpin RNA),构建相应的载体(psilencerTM3.1-H1neo shRNA1, 2, 3, 4).分别将这4种质粒瞬时转染入已转染了逆转录病毒质粒pLNCX2-Nurr1并稳定表达Nurr1 基因的PT67细胞中.在转染后24、48和72 h分别采用免疫荧光、免疫组化、免疫印迹以及Real-time PCR的方法检测细胞中Nurrl蛋白及基因的表达水平.结果显示,转染psilencerTM3.1-H1neo shRNA 2、3号24 h和48 h后,经免疫荧光和免疫组化检测,Nurr1在PT67细胞中表达显著降低;免疫印迹结果也显示,Nurr1蛋白量明显低于阴性对照组.psilencerTM3.1-H1neo shRNA 1、4对Nurr1蛋白表达没有明显影响.Real-time PCR 相对定量结果也同样证实2、3号转染后Nurr1基因表达的干扰效果明显,而1、4号结果相对较弱.通过本实验,我们筛选出了两段Nurr1特异性siRNA序列,且干扰效果在转染后24 h至48 h时效果最为明显.

参考文献：

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