| 目的:观察鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对体外培养神经干细胞(NSCs)细胞周期进程和cyclins表达的影响,探讨MCMV感染致脑发育异常的机制.方法:本实验体外分离、培养和鉴定BABL/C胎鼠NSCs,以感染复数(MOI)为5,1和0.1的MCMV smith毒株感染NSCs并于感染后1,2,3,4,5,6 d收集细胞,采用Cyclin/DNA双参数流式细胞术检测感染细胞cyclinA,cyclinB1,cyclinD1,cyclinE的表达和细胞周期时相的动态变化,观察MC-MV对感染NSCs细胞周期进程的影响.结果:体外分离培养的NSCs呈球样生长,神经干细胞特异性标记Nestin表达阳性,并可进一步分化为GFAP阳性的星形胶质细胞和NF-200阳性的神经元;各感染组cyclinA,cyclinB1,cyclinD1和cyclinE的表达均上调,其中MOI=0.1表达逐渐上升,在第6 d达峰值,MOI=1组表达高峰在第4 d,MOI=5组表达高峰在第3 d;感染组G_0/G_1期细胞比率减少,S期和G_2/M期细胞比率增加,其变化趋势与cyclins的表达基本一致,并随MOI的增加变化越明显.结论:Cyclin/DNA多参数流式细胞术可用于NSCs细胞周期的分析;MCMV可通过上调cyclinA,cyclinB1,cyclinD1,cyclinE的表达来影响NSCs细胞周期进程,并与MOI存在一定量效依赖关系;MCMV感染可诱导NSCs从G_0/G_1期进入S期,出现S期和G_2/M期偏移和阻滞,影响NSCs细胞周期进程,这可能是CMV抑制NSCs增殖并导致先天性脑发育异常的重要机制之一. |
