脑源性神经营养因子转基因成纤维细胞的构建与检测-神经解剖学杂志

脑源性神经营养因子转基因成纤维细胞的构建与检测

单位：昆明医学院:人体解剖学教研室,昆明,650031昆明医学院:神经科学研究所,昆明,650031

分类号：R3

出版年·卷·期（页码）：2011·27·第一期（1-1）

摘要：

目的:构建大鼠脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因修饰的成纤维细胞(fibroblasts FBs).方法:真核表达载体pcDNA3/BDNF由昆明医学院神经科学研究所提供.FBs取自胎鼠.pcDNA3/BDNF重组质粒载体以阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导转染FB,并统计转染率.应用BDNF抗体进行免疫细胞化学和Western Blot检测以鉴定BDNF在细胞内的表达.并在体外培养条件下,应用经转染FBs和未转染FBs的培养液上清培养肾上腺嗜铬细胞瘤(pc12)细胞,验证 BDNF的生物活性.结果:胎鼠成纤维细胞体外培养生长状况良好.FBs转染率为(52.14±3.31)%.免疫细胞化学和Western Blot结果表明BDNF在FBs中过表达,转染组与未转染组相比BDNF阳性细胞更多,染色更深,BDNF表达量明显增多,且具有促进PC12细胞生长的活性.结论:上述结果表明,大鼠源性BDNF基因修饰的FBs构建成功.

参考文献：

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