大鼠ZnT1基因siRNA慢病毒载体构建及筛选-神经解剖学杂志

大鼠ZnT1基因siRNA慢病毒载体构建及筛选

作者：房师强[1] 梅晰凡[1] 袁亚江[1] 郭占鹏[1] 郭跃[1] 曾锦浩[1] 王岩松[1] 尹海楠[2]

单位：辽宁医学院附属第一医院骨科,锦州,121001辽宁医学院附属第一医院心内科,锦州,121001

分类号：

出版年·卷·期（页码）：2012·28·第六期（1-1）

摘要：

目的:构建并筛选针对SD大鼠锌离子转运体1(ZnT1)的siRNA慢病毒载体.并检测其在大鼠神经元中的作用.方法:设计并合成针对ZnT1基因的3条(A,B,C)siRNA序列与1条阴性对照序列,将以上序列退火与pFU-GW-iRNA质粒相连接,通过测序鉴定后,分别与慢病毒包装质粒共感染293T细胞,检测收获病毒滴度后感染体外培养的SD大鼠脑皮层神经细胞,设置感染复数(MOI)分别为1,3,6,8,于转染后72 h计算转染效率.在最佳MOI值下,设置未经病毒感染组(CON组)、阴性对照病毒感染组(NC组)和慢病毒阳性干扰组(ZnT1-siR-NA-A组,ZnT1-siRNA-B组,ZnT1-siRNA-C组),72 h后利用Western blot技术检测ZnT1的表达情况,确定对ZnT1蛋白的最有效的干扰序列与抑制效率.结果:测序证实目的干扰序列已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒,收获的慢病毒颗粒滴度为8×108 TU/ml,其在MOI=6时对神经细胞的转染效率最高(93％),并保持神经细胞良好的生存状态.转染后ZnT1的表达被不同程度的抑制,A,B,C三种干扰序列对ZnT1的抑制率分别为47.74％±1.40％,81.19％±1.36％,94.10％ ±2.41％.结论:成功构建了ZnT1-siRNA慢病毒载体,其在MOI=6时对神经细胞具有最佳的转染效率,并有效沉默神经细胞中ZnT1蛋白的表达.

参考文献：

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