不同血清浓度对bFGF联合EGF诱导BMSCs向神经细胞分化的影响-神经解剖学杂志

不同血清浓度对bFGF联合EGF诱导BMSCs向神经细胞分化的影响

作者：何丁文[1] 殷嫦嫦[2] 殷明[3] 罗元一[1] 刘玉亮[1] 梁广胜[1]

单位：南昌大学第二附属医院骨一科,南昌330006;南昌大学研究生院医学部,南昌330006九江学院分析与检测实验室,九江,332000南昌大学第二附属医院骨一科,南昌,330006

分类号：

出版年·卷·期（页码）：2013·29·第一期（1-1）

摘要：

目的:探讨不同血清浓度条件下碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)联合表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向神经细胞分化方向的影响.方法:全骨髓贴壁法体外分离培养BMSCs,流式细胞法检测BMSCs表面骨髓基质标志CD90和造血细胞标志CD45,MTT法绘制第3(P3)代BMSCs生长曲线.取P4代细胞分为3组给予不同诱导条件,分别给予含20 ng/ml的bFGF和20 ng/ml EGF的无胎牛血清(A组)、10 ml/L胎牛血清(B组)及100 ml/L胎牛血清(C组)的DMEM/F-12培养液进行诱导,倒置显微镜观察细胞的形态变化,诱导6d时免疫组织化学法检测细胞内神经元特异性烯醇化酶(NSE)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,台盼蓝染色检测各组细胞的活力.结果:BM-SCs经3-4次传代培养后形态大致呈单一的长梭形或扁平形,流式细胞鉴定显示CD90阳性,CD45阴性；细胞生长曲线近似呈“S”形;诱导后可见细胞胞体收缩,呈双极、多极并伸出突起；诱导6d时3组活细胞率分别为:86.57％、95.29％、97.32％；免疫组化各组均见NSE、GFAP表达,3组NSE阳性率高于GFAP,A组NSE阳性率高于B、C组,差异具有统计学意义(P＜0.01),C组NSE阳性率高于B组,差异具有统计学意义(P＜0.01),A组GFAP阳性率低于B、C组,差异具有统计学意义(P＜0.01),C组GFAP阳性率高于B组,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:bFGF联合EGF可诱导BMSCs向神经细胞分化,在无血清条件下趋向于向神经元分化,在高浓度血清条件下趋向胶质细胞分化.

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