| 目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:分离新生小鼠海马组织，培养NSCs,采用电穿孔法将Nrf2 siRNA序列转染至NSCs,分别用real time RT-PCR和Western Blot检测敲减效率；运用BrdU掺入实验、Tuj1免疫荧光染色和CCK-8法检测Nrf2靶向siRNA对NSCs的增殖、分化能力和细胞活力的影响。通过脑立体定位技术，在成年小鼠海马部位注射Nrf2抑制剂Brusatol,应用Western Blot检测Nrf2的蛋白表达水平；通过Ki67、DCX免疫荧光染色检测下调Nrf2对海马神经发生的影响。利用活性氧簇(ROS)水平测定法和real time RT-PCR分别检测活性氧水平和氧化应激相关通路超氧化物歧化酶(SOD1和SOD2)的表达。结果:Nrf2的siRNA序列转染至NSCs, real time RT-PCR结果显示siRNA的敲减效率为(54.56±7.05)%(P<0.01),Western Blot结果显示siRNA的敲减效率为(39.50±7.90)%(P<0.01);与NC-siRNA组相比，Nrf2-siRNA组的BrdU阳性率、细胞活力均下降(P<0.01),1%胎牛血清诱导分化后，Nrf2-siRNA组Tuj1阳性率下降(P<0.01);同时Nrf2-siRNA组SOD1和SOD2的mRNA水平均较NC-siRNA组下降(P<0.05),而ROS水平较NC-siRNA组升高(P<0.05)。脑内注射Nrf2抑制剂Brusatol后，与Control组相比，Brusatol组的海马组织Nrf2蛋白表达水平降低(P<0.01);Brusatol组Ki67阳性、DCX阳性细胞数量均减少(P<0.05和P<0.01);此外Brusatol组SOD1 mRNA和SOD2水平均较Control组下降(P<0.05),而ROS水平较Control组升高(P<0.05)。结论:Nrf2基因敲减导致NSCs氧化应激水平升高，进而抑制了NSCs增殖和分化能力。 |
