| 目的:探究不同转录因子组合诱导大鼠海马星形胶质细胞(AS)转分化为多巴胺(DA)能神经元表型的效率。方法:构建表达特定的转录因子的重组慢病毒，包括MLN组合(Mash1、Lmx1a和Nurr1)、MNNg组合(Mash1、Nurr1和Ngn2)、LNNg组合(Lmx1a、Nurr1和Ngn2)以及MLNg组合(Mash1、Lmx1a和Ngn2),分别感染大鼠AS,利用免疫荧光染色检测细胞中神经元微管蛋白(Tuj1)、酪氨酸羟化酶(TH)、微管相关蛋白2(MAP2)、多巴脱羧酶(DDC)和突触素1(SYN1)的表达。结果:成功构建出携带有不同转录因子组合的重组慢病毒载体，且能够在细胞内正常表达。在慢病毒感染海马AS第14和28 d, MLN组合分别诱导出20%和60%左右的TH阳性DA能神经元，第28 d时LNNg组合诱导出20%左右TH阳性的DA能神经元，MLNg和MNNg组合仅诱导出Tuj1阳性神经元，进一步染色发现MLN组合能够诱导出多种成熟神经元标记物MAP2、DDC及SYN1表达。结论:转录因子间的协同作用是DA能神经元诱导成功的重要条件，MNNg、LNNg和MLNg组合未能有效诱导大鼠海马AS表达DA能神经元表型，MLN组合仍是高效诱导DA能神经元表型的转录因子组合。 |
